Co się stanie, jeśli dodasz za dużo enzymu restrykcyjnego?
Co się stanie, jeśli dodasz za dużo enzymu restrykcyjnego?

Wideo: Co się stanie, jeśli dodasz za dużo enzymu restrykcyjnego?

Wideo: Co się stanie, jeśli dodasz za dużo enzymu restrykcyjnego?
Wideo: enzymy restrykcyjne i elektroforeza 2024, Może
Anonim

Może wystąpić niepełne trawienie kiedy za dużo lub także mały enzym jest używany. ten obecność zanieczyszczeń w ten Próbka DNA Móc hamować enzymy , co również skutkuje niepełnym trawieniem. Trochę Enzymy restrykcyjne wymagają kofaktorów do pełnej aktywności.

Poza tym, dlaczego enzymy restrykcyjne są dodawane na końcu?

ten enzym restrykcyjny jest zwykle ostatni składnik dodany na reakcję, aby upewnić się, że nie jest narażony na ekstremalne warunki. Złożoną reakcję należy wymieszać po enzym dodatek. Wymieszaj wszystkie roztwory zawierające Enzymy restrykcyjne delikatnie, aby uniknąć enzym dezaktywacja.

Co więcej, jak można poprawić trawienie enzymami restrykcyjnymi? Nie używaj więcej niż zalecane enzym ilość (np. 10 jednostek enzym na mikrogram DNA). Zmniejsz ilość enzym w reakcji, jeśli to konieczne. Unikaj przedłużonej inkubacji trawienie reakcja. Użyj zalecanego buforu reakcyjnego.

Wiedz też, dlaczego enzym restrykcyjny miałby nie ciąć?

Przygotowanie DNA do cięcia powinnam być wolne od zanieczyszczeń, takich jak fenol, chloroform, alkohol, EDTA, detergenty lub nadmierne sole, z których wszystkie mogą zakłócać enzym restrykcyjny działalność. Jeśli inhibitor (często sól, EDTA lub fenol) jest obecny, kontrolne DNA będzie: nie ścięte po wymieszaniu.

Dlaczego ilość enzymu może powodować aktywność gwiazd?

Aktywność gwiazdy to rozluźnienie lub zmiana specyfiki restrykcji enzym pośredniczy cięcie DNA, które Móc występują w warunkach reakcji znacznie różniących się od optymalnych dla enzym . Aktywność gwiazd może dzieje się z powodu obecności Mg2+, jak jest widziany na przykład w HindIII.

Zalecana: