Czy możesz zsekwencjonować produkt PCR?

2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2023-12-16 00:21

Bezpośredni Sekwencjonowanie z Produkty PCR . Jest całkiem możliwe, aby bezpośrednio sekwencja a Produkt PCR bez wcześniejszego klonowania fragmentu. Bezpośredni Sekwencjonowanie PCR rzadko się udaje, chyba że ty poświęć trochę czasu na upewnienie się, że ty nie wpadają w jeden z wielu pułapek.

Czym w ten sposób jest sekwencjonowanie PCR?

Bezpośredni Sekwencjonowanie z PCR Produkty. Musisz usunąć wszystkie PCR startery i niewbudowane nukleotydy, zanim produkt zostanie sekwencjonowany . Sekwencjonowanie używa tylko jednego podkładu zamiast dwóch użytych w PCR . Jeśli nie usuniesz obu podkładów, dostaniesz dwa sekwencje nakładają się na siebie, które nie są czytelne.

Podobnie, czy mogę użyć starterów PCR do sekwencjonowania? startery do PCR są przeznaczone dla PCR amplifikacja w celu uzyskania amplikonu. Startery do sekwencjonowania są używany do sekwencja fragment DNA i ujawnij jego DNA sekwencja zidentyfikować. 4. Dwa startery do PCR są potrzebne w PCR reakcja (zwykle); tylko jeden starter do sekwencjonowania jest dodawany do sekwencjonowanie reakcja.

Mając to na uwadze, jak testujesz produkty PCR?

Wykrywanie i analiza Produkty PCR . ten produkt z PCR powinien być fragmentem lub fragmentami DNA o określonej długości. Do wykrywania amplifikowanych sekwencji można zastosować wiele technik (patrz Tabela). Najprostszą i powszechnie stosowaną techniką jest elektroforeza Produkt PCR na żelu agarozowym z EtBr (bromkiem etydyny).

Dlaczego konieczne jest oczyszczenie produktów PCR przed sekwencjonowaniem?

Oczyszczenie DNA z PCR reakcja jest typowa potrzebny do dalszego użytkowania i ułatwia usuwanie enzymów, nukleotydów, starterów i składników buforowych.