Jaki jest cel korzystania z ddNTP?
Jaki jest cel korzystania z ddNTP?

Wideo: Jaki jest cel korzystania z ddNTP?

Wideo: Jaki jest cel korzystania z ddNTP?
Wideo: Как комментируют депутаты возможность введения чрезвычайного положения | ТСН.16:45 2024, Listopad
Anonim

DdNTP odnosi się do Dideoksynukleotydy trifosforany, które są używane w metodzie Sanger dideoxy do wytwarzania różnych długości nici DNA do sekwencjonowania DNA. Powoduje to zakończenie procesu polimeryzacji DNA (lub wydłużania DNA), ponieważ proces ten wymaga grupy 3'-OH, aby kontynuować.

W związku z tym, dlaczego ddNTP są używane w sekwencjonowaniu?

Dideoksynukleotydy są inhibitorami wydłużania łańcucha polimerazy DNA, używany w metodzie Sangera dla DNA sekwencjonowanie . Dideoksyrybonukleotydy nie mają 3' grupy hydroksylowej, dlatego nie może nastąpić dalsze wydłużanie łańcucha, gdy ten dideoksynukleotyd znajdzie się w łańcuchu. Może to prowadzić do zakończenia DNA sekwencja.

Podobnie, czy ddNTPs dołączają się do dNTP? Co najmniej jeden z dNTP są znakowane radioaktywnie, aby ułatwić wizualizację produktów replikacji. Na koniec każda probówka otrzymuje jeden z czterech specjalnych nukleotydów zwanych dideoksynukleotydy ( ddNTP ). Jednak po włączeniu polimeraza DNA nie może dalej wydłużać łańcucha, ponieważ potrzebuje 3'-OH do przytwierdzać do następnego nukleotydu.

Podobnie można zapytać, w jaki sposób ddNTP zatrzymują reakcję sekwencjonowania?

Gdy występuje w małych ilościach w reakcje sekwencjonowania , trifosforany dideoksyrybonukleozydów ( ddNTP ) zakończyć reakcja sekwencjonowania w różnych pozycjach rosnących nici DNA. ddNTP zatrzymują reakcję sekwencjonowania ponieważ: powodują odpadanie polimerazy DNA z nici matrycy. C.

Jaką technikę wykorzystującą dideoksynukleotydy można zastosować?

Sekwencjonowanie Sangera to metoda sekwencjonowania DNA w oparciu o selektywną inkorporację zakańczania łańcucha dideoksynukleotydy przez polimerazę DNA podczas replikacji DNA in vitro. Opracowany przez Fredericka Sangera i współpracowników w 1977 r. był najszerzej używany sekwencjonowanie metoda przez około 40 lat.

Zalecana: