Spisu treści:

Jak wybierasz klony?
Jak wybierasz klony?

Wideo: Jak wybierasz klony?

Wideo: Jak wybierasz klony?
Wideo: JAK POWSTALI ŻÓŁNIERZE KLONY? [HOLOCRON] 2024, Listopad
Anonim

Kiedy wybierając a klon , upewnij się, że korzenie są mocne, białe i chętnie wystają z podłoża. Jeśli korzenie są brązowe i pomarszczone lub w inny sposób wydają się nieaktywne, odłóż je i poszukaj lepszego.

Poza tym, jak sklonować pojedynczą komórkę?

  1. Policz komórki, aby umieścić ~16 000 komórek w pierwszej studzience (A1) 96-studzienkowej płytki zawierającej 200 µl pożywki.
  2. Usuń 100 µL z komórek zawierających A1 i wymieszaj z B1, pipetując w górę iw dół 3x, aby dobrze wymieszać przed usunięciem 100 µL i wymieszaniem z C1 itd.

Jak wybrać kolonię komórek ssaków? Umieść płytkę pod mikroskopem, aby wybrać niezróżnicowane zdrowe kolonie . Wybierz kolonie za pomocą pipety P-20 ustawionej na 10ul. Ostrożnie wybierać a kolonia bez rozbijania kolonia w singla komórki i przenieść do 96-studzienkowej płytki z trypsyną. Odpipetuj kilka razy w górę i w dół, aby rozproszyć kolonia.

W związku z tym, jak używać cylindra do klonowania?

Za pomocą sterylne średnie kleszczyki, podnieś cylinder do klonowania . Delikatnie naciśnij płaski spód cylinder do gładkiego smaru silikonowego i usuń gwałtownym pionowym ruchem. Jeśli zostanie to zrobione prawidłowo, zapewni to równomierne rozprowadzenie smaru na dnie cylinder . Ustaw cylinder nad kolonią.

Jak wybierasz kolonie do stabilnych linii komórkowych?

Protokół generowania stabilnych linii komórkowych wymaga kilku kroków, jak pokazano poniżej:

  1. Wygeneruj krzywą zabijania, aby określić optymalne stężenie antybiotyku.
  2. Transfekuj komórki pożądanym konstruktem plazmidowym
  3. Wybierz i rozwiń stabilne kolonie poliklonalne.
  4. Zidentyfikuj pojedyncze klony przez ograniczone rozcieńczenie i ekspansję.

Zalecana: