Spisu treści:

Jak wstawić gen do plazmidu?
Jak wstawić gen do plazmidu?

Wideo: Jak wstawić gen do plazmidu?

Wideo: Jak wstawić gen do plazmidu?
Wideo: HW5 inserting genes into plasmids 2024, Listopad
Anonim

Podstawowe kroki to:

  1. Rozciąć plazmid i „wklej” w gen . Proces ten opiera się na enzymach restrykcyjnych (które tną DNA) i ligazie DNA (która łączy DNA).
  2. Wstawić ten plazmid do bakteria.
  3. Dorośnij dużo plazmid -przenosi bakterie i używa ich jako "fabryk" do produkcji białka.

Jak można wstawić gen do plazmidu GCSE?

To jest wstawiony do plazmidu przy użyciu enzymów ligazy. ten plazmid wchodzi do komórka bakteryjna. transgeniczna bakteria rozmnaża się, w wyniku czego w miliony identycznych bakterii, które produkują ludzką insulinę.

Dodatkowo, jak Subklonować gen? Podstawowe kroki dla Subklonowanie Uwalniasz i oczyszczasz swój insert z wektora macierzystego, ligujesz ten insert z przygotowanym wektorem docelowym, przekształcasz tę reakcję ligacji w kompetentne komórki bakteryjne. Następnie przeszukujesz przekształcone komórki pod kątem wstawki.

Biorąc to pod uwagę, jakie są 4 etapy klonowania genów?

W klasycznych protokołach trawienia enzymami restrykcyjnymi i klonowania ligacji, klonowanie dowolnego fragmentu DNA obejmuje zasadniczo cztery etapy:

  • izolacja interesującego DNA (lub docelowego DNA),
  • podwiązanie,
  • transfekcja (lub transformacja) i.
  • procedurę przesiewową/selekcji.

Jak wzmocnić plazmid?

Procedura eksperymentalna

  1. Uruchom PCR i oczyść produkt PCR: Uruchom PCR, aby zamplifikować DNA wstawki.
  2. Trawić swoje DNA:
  3. Wyizoluj swoją wstawkę i wektor przez oczyszczanie na żelu:
  4. Zliguj swoją wstawkę do swojego wektora:
  5. Transformacja:
  6. Wyizoluj gotowy plazmid:
  7. Zweryfikuj swój plazmid przez sekwencjonowanie:

Zalecana: